【 試劑盒原理】

     轉(zhuǎn)基因快速檢測(cè)試紙用特異性抗 Cry1Ab/1Ac 單抗包被的微孔板和酶標(biāo)記抗 Cry1Ab/1Ac 單抗，雙抗體夾心法檢測(cè) Cry1Ab/1Ac 基因表達(dá)產(chǎn)物， 轉(zhuǎn)基因快速檢測(cè)試紙可以高靈敏度和特異性的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry1Ab/1Ac 蛋白。

【試劑盒組份（規(guī)格）】

預(yù)包被板（抗 Cry1Ab/1Ac 單抗）      12 孔×8

Cry1Ab/1Ac 酶標(biāo)抗體                 12 ml×1 瓶

20×濃縮洗滌液                      30 ml×1 瓶

5×抽提液/稀釋緩沖液                30 ml×1 瓶

底物液 A                            7 ml×1 瓶

底物液 B                            7 ml×1 瓶

終止液                              7 ml×1 瓶

使用說(shuō)明書(shū)                          1 份

0ppb 陰性對(duì)照                       1ml

4 個(gè)不同濃度的標(biāo)樣：           

0.5 ppb 1.0 ppb 2.0 ppb 4.0 ppb          各 1ml

【試劑準(zhǔn)備】

    試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液，5×抽提液（30 ml）加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液，4℃存放備用。

【樣品準(zhǔn)備】

    稱(chēng)取約 20 mg 葉片，加 0.5 ml 1×抽提液（使用前 30 min 放置室溫）研磨至勻漿，室溫放置 30 min，測(cè)定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。

    測(cè)定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時(shí)，樣品稱(chēng)取約 40 mg，加 1 ml 1×抽提液研磨。

【ELISA 反應(yīng)】

1. 依次加 100 μl 陰性對(duì)照，標(biāo)準(zhǔn)品（4 個(gè)不同濃度的標(biāo)樣：0.5 ppb，1.0 ppb，2.0 ppb, 4.0 ppb）和待測(cè)樣品至 96 孔板；

2. 用封口膜蓋住 96 孔板，快速搖動(dòng)平板混勻樣品；

3. 37℃恒溫箱孵育 30 min；

4. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；

5. 按順序在每個(gè)小孔中加入 100 μl Cry1Ab/1Ac 酶標(biāo)抗體，然后重復(fù)步驟 2；

6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；

7. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；

8. 依次加入 50 μl 底物 A 液，50 μl 底物 B 液，重復(fù)步驟 2；

9. 室溫（20-25℃）避光孵育 10 min，加 50 μl 終止液，充分混勻終止反應(yīng)，15min 以?xún)?nèi)在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。 在 450 nm 為主波長(zhǎng)，630 nm 為次波長(zhǎng)（或單波長(zhǎng) 450 nm）下，用空白孔校零，再讀取各孔 OD 值。

【轉(zhuǎn)基因測(cè)試盒使用注意事項(xiàng)】

1. 測(cè)定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育（否則會(huì)影響試驗(yàn)準(zhǔn)確性），注意12 連管必須溫育后再?gòu)钠桨迳先∠拢词褂猛甑念A(yù)包被板條應(yīng)置于有干燥劑的封口袋中密封保存；

2. 試劑使用前應(yīng)充分搖勻；

3. 搖動(dòng)平板混勻時(shí)注意避免樣品之間交叉污染；

4. 使用洗滌液漂洗時(shí)，洗滌液需要填滿(mǎn)每個(gè)小孔，進(jìn)行充分漂洗；

5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測(cè)量，可以暫時(shí)在 4 ℃避光保存，但是最好在 24 h 內(nèi)測(cè)定；

6. 結(jié)果判讀請(qǐng)?jiān)诜磻?yīng)終止后 15 min 內(nèi)完成。